Tiêu hóa DNA nhanh chóng Thuốc thử sinh hóa 5-15Min Enzyme BsaI CE đã được phê duyệt

Enzyme BsaI

enzyme là một loạt các enzyme giới hạn được thiết kế để phân hủy DNA nhanh chóng trong 5-15 phút.enzyme có thể được sử dụng để tiêu hóa plasmid, DNA bộ gen và virus cũng như các sản phẩm PCR.Tất cả các enzym đều thể hiện hoạt tính vượt trội trong dung dịch đệm phổ quát, do đó, hệ thống phản ứng phân hủy enzym được đơn giản hóa.Hơn nữa, các enzym này cung cấp khả năng dự phòng enzym tuyệt vời, cho phép dễ dàng tiêu hóa các mẫu thừa hoặc khó tiêu cơ chất.

Vận chuyển và lưu trữ

Các thành phần được vận chuyển với túi đá và có thể được bảo quản ở -20 ° C trong 2 năm.

Địa điểm cắt

5'-GGTCTC (N)1↓ -3 '

3'-CCAGAG (N)5↑ -5 '

Điều kiện phản ứng được đề xuất

1 × Bộ đệm FuniCut ™;Ủ ở 37 ℃.

Ngừng hoạt động do nhiệt

Ủ ở 80 ℃ trong 20 phút.

Kiểm soát chất lượng

1. Định nghĩa hoạt động:1 μg pPIC9K DNA được tiêu hóa hoàn toàn với 1 μL enzyme trong 15 phút ở 37 ℃ trong tổng thể tích phản ứng là 20 μL.

2. Ủ bệnh kéo dài / Thử nghiệm hoạt động của ngôi sao:Không phát hiện được sự phân hủy DNA 1 μg pPIC9K do nhiễm nuclease hoặc hoạt động sao xảy ra trong quá trình ủ với 1 μL FuniCut ™ BsaI trong 3 giờ ở 37 ℃.Thời gian ủ lâu hơn có thể dẫn đến hoạt động của sao.

3. Thử nghiệm thắt chặt và hồi phục (L / R):Sau khi được tiêu hóa bằng enzym 1μL ở điều kiện tối ưu, sản phẩm tái chế từ quá trình phân hủy có thể được phân loại dưới T4 DNA Ligase ở 22 ℃.Sản phẩm thắt có thể được định vị lại bằng enzym.

4. Hoạt động Endonuclease không đặc hiệu:Việc ủ 1 μL enzyme với 1 μg DNA plasmid siêu xoắn trong 4 giờ ở 37 ℃ không làm thay đổi tình trạng siêu cuộn.

Hướng dẫn

1. Giao thức tiêu hóa nhanh các DNA khác nhau

1.1 Kết hợp các thành phần phản ứng sau trên nước đá theo thứ tự được chỉ ra:

[Lưu ý]: * Đối với các sản phẩm PCR tinh khiết.Số lượng 10 ×Bộ đệm FuniCut ™có thể giảm xuống 2 μL do cường độ ion còn lại trong các sản phẩm PCR chưa được tinh chế.Sản phẩm PCR được khuyến nghị phải được làm sạch trước khi phân hủy Khi Sản phẩm PCR sẽ được sử dụng để nhân bản.

1.2 Trộn nhẹ nhàng (không xoáy) và xoay tròn.

1.3 Ủ ở 37 ℃ trong 15 phút (DNA plasmid) hoặc trong 15-30 phút (sản phẩm PCR) hoặc trong 30-60 phút (DNA bộ gen).

1.4 Tùy chọn: Bất hoạt enzyme bằng cách đun nóng trong 20 phút ở 80 ℃.

2. Sự tiêu hóa kép và nhiều lần của DNA

2.1 Sử dụng 1 μL của mỗi enzym và mở rộng các điều kiện phản ứng một cách thích hợp.

2.2 Thể tích tổng hợp của các enzym trong hỗn hợp phản ứng không được vượt quá 1/10 tổng thể tích phản ứng.

2.3 Nếu các enzym yêu cầu nhiệt độ phản ứng khác nhau, bắt đầu với enzym yêu cầu nhiệt độ thấp hơn, sau đó thêm enzym thứ hai và ủ ở nhiệt độ cao hơn.

3. Mở rộng quy mô phản ứng tiêu hóa DNA plasmid

[Ghi chú]: Ủ trong bộ điều nhiệt nước, bộ điều nhiệt kim loại hoặc bộ điều nhiệt cát.Tăng thời gian ủ nếu tổng thể tích phản ứng vượt quá 20 μL.

Số lượng trang web nhận dạng trong DNA