|
Thông tin chi tiết sản phẩm:
|
| Tên sản phẩm: | qPCR | Nhiệt độ bảo quản: | –20 ° C |
|---|---|---|---|
| Mạnh mẽ và tích cực để tổng hợp cDNA: | lên đến 55 ° C. | Đăng kí: | PCR |
| Âm lượng: | 1ml | Phiên mã ngược: | phạm vi nhiệt độ (42-60 ° C) |
| Điểm nổi bật: | Universal TaqMan Multiplex QPCR,TaqMan Multiplex QPCR Thuốc thử sinh hóa,1ml TaqMan Multiplex QPCR |
||
Kết hợp tổng thể qPCR Multix Multix Multix TaqMan
Nguyên tắc thiết kế sơn lót:
1. Chiều dài của sản phẩm khuếch đại được khuyến khích trong khoảng 80-300 bp;
2. Chiều dài lớp sơn lót: 18-25 bp;
3. Hàm lượng cơ bản G + C trong sơn lót nên từ 40% -60%;
4. Chênh lệch giá trị Tm giữa mồi thuận và mồi ngược nhỏ hơn 2 ℃, và giá trị Tm trong khoảng 58-62 ℃ là tốt nhất;
5. Tính ngẫu nhiên của phân phối cơ sở;
6. Tốt hơn hết là các đoạn mồi không chứa các chuỗi tự bổ sung, nếu không chúng sẽ tạo thành cấu trúc kẹp tóc thứ cấp;
7. Không được có nhiều hơn 4 bazơ bổ sung hoặc tương đồng giữa hai mồi, nếu không sẽ hình thành chất dimer của mồi, đặc biệt là sự xen phủ bổ sung ở đầu 3 ';
8. Cơ sở đầu cuối 3 'của sơn lót được đề xuất là G hoặc C;
9. Không tìm thấy sản phẩm không đặc hiệu nào khác trong kết quả so sánh của NCBI.
Giới thiệu kết hợp tổng thể qPCR Multix Multix Multix của TaqMan:
Sản phẩm này là giải pháp trộn trước 2x cho qPCR sử dụng phương pháp huỳnh quang kỹ thuật số GSK Green I.Thành phần cốt lõi, Taq DNA Polymerase, là một DNA Polymerase hoạt hóa bằng nhiệt bị chặn bởi phương pháp kháng thể, có thể ức chế hiệu quả sự khuếch đại không đặc hiệu trong điều kiện nhiệt độ thấp.Trong khi đó, kết hợp với phản ứng Buffer được tối ưu hóa cho qPCR, Taq DNA Polymerase rất thích hợp cho phản ứng qPCR có độ đặc hiệu và độ nhạy cao.Đường cong chuẩn tốt có thể thu được trong một vùng định lượng rộng, chính xác, có thể tái tạo và đáng tin cậy để phân tích định lượng các gen mục tiêu.Đồng thời, sản phẩm này có chứa ROX Passive Reference Dye đặc biệt phù hợp để sử dụng cho tất cả các thiết bị qPCR và không cần điều chỉnh nồng độ ROX trên các thiết bị khác nhau.Thuốc nhuộm màu xanh được thêm vào trong hỗn hợp trộn trước, có tác dụng đánh dấu khi thêm mẫu và chất pha loãng mẫu màu vàng được cung cấp cùng lúc.Khi mẫu được pha loãng bằng dung dịch pha loãng mẫu màu vàng và thêm vào hỗn hợp trộn trước phản ứng màu xanh lam, màu sắc sẽ chuyển từ xanh lam sang xanh lục, có thể đóng vai trò đánh dấu trong quá trình chuẩn bị hệ thống phản ứng và ngăn ngừa rò rỉ hoặc pha trộn sai.Phổ của thuốc nhuộm xanh lam và vàng không trùng lặp với thuốc nhuộm qPCR và không ảnh hưởng đến kết quả phản ứng.
Quy trình / Thủ tục khảo nghiệm vềKết hợp tổng thể qPCR Multix Multix Multix TaqMan:
1. (Tùy chọn) pha loãng mẫu:
Bộ dụng cụ này cung cấp Bộ đệm pha loãng tiêu bản MÀU VÀNG 40 lần, Dung dịch pha loãng tiêu bản màu vàng được pha loãng 40 lần có thể được sử dụng để xác định chính xác liệu Tiêu bản đã được thêm vào chất lỏng phản ứng qPCR hay chưa bằng cách thay đổi màu sắc của chất lỏng.Lấy hệ thống phản ứng qPCR 20ul làm ví dụ, theo lượng mẫu pha loãng được thêm vào dung dịch phản ứng qPCR 20ul, phương pháp pha loãng tương ứng của mẫu ban đầu có thể được tham khảo bảng sau (lấy mẫu ban đầu được pha loãng đến 100ul làm ví dụ ):
| Thêm mẫu đã pha loãng vào dung dịch phản ứng qPCR 20ul (ul) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | số 8 |
| Thêm Bộ đệm pha loãng mẫu MÀU VÀNG 40x vào Hệ thống pha loãng mẫu 100ul (ul) | 50 | 25 | 16,7 | 12,5 | 10 | 8,4 | 7.2 | 6,3 |
| Thêm Hệ thống pha loãng mẫu 100ul vào mẫu chính (ul) | x | x | x | x | x | x | x | x |
| khối lượng thêm Nuclease - Nước miễn phí (ul) | 50-x | 75-x | 83,3-x | 87,5-x | 90-x | 91,6-x | 92,8-x | 93,7-x |
Thí dụ:
Mẫu đã pha loãng 2ul nên được thêm vào hệ thống phản ứng qPCR 20ul.
Lấy hệ thống Pha loãng Mẫu 100ul làm ví dụ, khi thể tích Mẫu ban đầu là 20ul, 25ul Bộ đệm pha loãng Mẫu màu vàng 40x được thêm vào, và sau đó Nước không chứa Nuclease 55ul được thêm vào tổng thể tích 100ul.
BỘ NÂNG CẤP TEMPLATE MÀU VÀNG 40x giờ là 10x.Thêm 2ul của Mẫu đã pha loãng vào Dung dịch đệm pha loãng 20ul, và Dung dịch đệm pha loãng mẫu 40 × MÀU VÀNG cuối cùng là 1x.Kết luận, Bộ đệm pha loãng mẫu màu vàng phải bằng 1 lần trong hệ thống qPCR cuối cùng.
Thông tin sản phẩm của hỗn hợp tổng thể qPCR Multix multiplex TaqMan:
| Tên sản phẩm | Nhận dạng sản phẩm | Người mẫu |
| Kết hợp tổng thể qPCR Multix Multix Multix TaqMan | GS-MBP0044-01 | 1ml |
| GS-MBP0044-05 | 5 × 1 mL | |
| GS-MBP0044-15 | 15 × 1 mL |
Điều kiện lưu trữ và xử lý với hỗn hợp tổng thể qPCR đa năng TaqMan đa năng:
Vận chuyển túi đá ướt;Bảo quản ở nhiệt độ -20 ℃, có giá trị trong 12 tháng.
Ghi chú:Nếu không cần pha loãng tiêu bản hoặc nếu không sử dụng dung dịch pha loãng tiêu bản của G3362-2, bạn có thể bỏ qua bước này.
2.Quy trình phản ứng PCR (có thể được điều chỉnh theo các thiết bị):
a: Nếu độ đặc hiệu của bộ khuếch đại cần được cải thiện, có thể sử dụng quy trình hai bước hoặc nhiệt độ ủ;Để nâng cao hiệu quả khuếch đại, có thể sử dụng quy trình ba bước hoặc kéo dài thời gian.
Ghi chú:
1. Vui lòng đeo găng tay dùng một lần trong khi vận hành để tránh nhiễm RNase.
2. Các sản phẩm phiên mã ngược có thể được lưu trữ ở -20 ℃ trong một thời gian ngắn.Nếu cần bảo quản lâu dài, nên bảo quản chúng ở nhiệt độ -80 ℃ sau khi đóng gói để tránh lặp lại chu kỳ đông lạnh-rã đông.
3. Nếu tiêu bản có nguồn gốc từ sinh vật nhân chuẩn, nên chọn mồi Oligo (dT) 18 và ghép nó với đuôi 3 'Poly A của mRNA sinh vật nhân chuẩn để thu được cDNA có chiều dài đầy đủ cao nhất.
4. Để phiên mã ngược RNA nhân sơ, nên sử dụng Primer Hexamer ngẫu nhiên hoặc Gene cụ thể.
5. Random Hexamer Primer có khả năng ứng dụng rộng rãi và phù hợp với các khuôn mẫu mRNA, rRNA, tRNA, RNA nhỏ và lncRNA.
6. Nếu tiến hành phiên mã ngược bằng xét nghiệm qPCR, có thể trộn Oligo (dT) 18 Primer và Random Hexamer Primer để làm cho hiệu quả tổng hợp cDNA ở tất cả các vùng của mRNA là như nhau, giúp cải thiện tính xác thực và độ lặp lại của kết quả định lượng.
7. Nếu các mồi qPCR tiếp theo được thiết kế trên các exon, thì bước loại bỏ bộ gen có thể được bỏ qua.
Các vấn đề thường gặp và giải pháp:
| Mô tả vấn đề | Lý do có thể | Các giải pháp |
| Khi kết thúc phản ứng, không có đường cong khuếch đại nào xuất hiện hoặc giá trị CT xuất hiện quá muộn | Nồng độ mẫu quá thấp | Lặp lại thí nghiệm để giảm bội số độ pha loãng của mẫu và bắt đầu từ nồng độ cao nhất khi nồng độ mẫu chưa biết |
| Suy thoái mẫu | Tiêu bản đã được chuẩn bị một lần nữa và thử nghiệm được lặp lại | |
| Có chất ức chế PCR trong hệ thống | Nói chung, mẫu được mang vào, tỷ lệ pha loãng của mẫu được tăng lên hoặc mẫu có độ tinh khiết cao được sửa lại và lặp lại | |
| Lớp sơn lót có thể xuống cấp | Các loại sơn lót không được sử dụng trong một thời gian dài trước tiên nên được kiểm tra tính toàn vẹn bằng phương pháp điện di PAGE để loại trừ khả năng xuống cấp | |
| Hiệu quả khuếch đại thấp | tăng nồng độ mồi, thử quy trình khuếch đại ba bước hoặc thiết kế lại mồi | |
| Sản phẩm khuếch đại quá dài | Độ dài sản phẩm khuếch đại được kiểm soát trong khoảng 80-300 bp | |
| Điều khiển trống hiển thị tín hiệu | Ô nhiễm hệ thống phản ứng | Đầu tiên, nên thay nước đối chứng trống.Nếu tình trạng tương tự vẫn xảy ra, nên thay mồi, ống hút và ống PCR hoặc bắt đầu Master Mix mới.Hệ thống phản ứng được chuẩn bị trong một bàn siêu sạch để giảm ô nhiễm khí dung |
| Khuếch đại không đặc hiệu chẳng hạn như chất làm mờ mồi xuất hiện |
Nói chung, các sản phẩm khuếch đại xuất hiện trong mẫu điều khiển trắng sau 35 chu kỳ là điều bình thường, cần được phân tích bằng đường cong nóng chảy. Thiết kế lại mồi, điều chỉnh nồng độ mồi hoặc tối ưu hóa quy trình phản ứng PCR |
|
| Đường cong nóng chảy có nhiều đỉnh | Thiết kế lớp lót kém | Lớp sơn lót mới được thiết kế lại theo nguyên tắc thiết kế lớp sơn lót |
| Nồng độ sơn lót quá cao | Giảm nồng độ mồi một cách thích hợp | |
| Có sự ô nhiễm bộ gen trong khuôn mẫu cDNA | Dung dịch RNA chiết xuất được tiêu hóa bằng cách sử dụng các enzyme DNA, chẳng hạn như DSDNase, để loại bỏ sự ô nhiễm bộ gen hoặc để thiết kế các đoạn mồi transintron | |
| Khả năng tái lập kém của các thí nghiệm | Sai số khi thêm mẫu lớn |
Việc sử dụng pipet chính xác, với pipet chính xác đầu hút chất lượng cao; Độ pha loãng tiêu bản cao, thêm tiêu bản thể tích lớn để giảm sai số lấy mẫu; Thể tích phản ứng của qPCR đã được mở rộng |
| Nồng độ mẫu quá thấp | Lặp lại thí nghiệm để giảm thời gian pha loãng của mẫu | |
| Độ lệch nhiệt độ tại các vị trí khác nhau của thiết bị qPCR | Hiệu chỉnh thiết bị qPCR thường xuyên | |
| Đường cong khuếch đại không mịn | Tín hiệu huỳnh quang quá yếu, được tạo ra sau khi hiệu chỉnh hệ thống |
Đảm bảo rằng thuốc nhuộm được trộn trước trong Master Mix không bị biến chất; Thay thế tín hiệu huỳnh quang để thu thập vật tư tiêu hao qPCR tốt hơn |
| Đường cong khuếch đại bị đứt hoặc trượt | Nồng độ mẫu cao hơn và giá trị điểm cuối đường cơ sở lớn hơn giá trị CT | Điểm cuối đường cơ sở (giá trị Ct -3) đã bị giảm và dữ liệu được phân tích lại |
| Đường cong khuếch đại của các Giếng riêng lẻ đột ngột giảm mạnh | Có bọt khí trong ống phản ứng |
Đảm bảo rằng MIX được hòa tan hoàn toàn, không xoáy và dao động đều; Sau khi mẫu được thêm vào, các bong bóng được loại bỏ bằng cách ly tâm với đàn hồi nhẹ. Thời gian trước biến tính được kéo dài đến 10 phút để loại bỏ các bong bóng |
Nếu bạn cần thêm thông tin về kết hợp tổng thể qPCR đa năng Universal TaqMan, vui lòng cho chúng tôi biết trực tuyến, cảm ơn bạn.
Người liên hệ: Ms Kris
Tel: +8613049739311
