2 × Màu xanh phổ quát GSK Green QPCR Master Mix với 40 × Màu vàng bộ đệm pha loãng

2 × Màu xanh phổ quát GSK Green qPCR Master Mix với bộ đệm pha loãng mẫu 40 × màu vàng

Giới thiệu hỗn hợp tổng thể qPCR 2 × Universal Blue GSK Green:

Sản phẩm này là giải pháp trộn trước 2x cho qPCR sử dụng phương pháp huỳnh quang kỹ thuật số GSK Green I.Thành phần cốt lõi, Taq DNA Polymerase, là một DNA Polymerase hoạt hóa bằng nhiệt bị chặn bởi phương pháp kháng thể, có thể ức chế hiệu quả sự khuếch đại không đặc hiệu trong điều kiện nhiệt độ thấp.Trong khi đó, kết hợp với phản ứng Buffer được tối ưu hóa cho qPCR, Taq DNA Polymerase rất thích hợp cho phản ứng qPCR có độ đặc hiệu và độ nhạy cao.Đường cong chuẩn tốt có thể thu được trong một vùng định lượng rộng, chính xác, có thể tái tạo và đáng tin cậy để phân tích định lượng các gen mục tiêu.Đồng thời, sản phẩm này có chứa ROX Passive Reference Dye đặc biệt phù hợp để sử dụng cho tất cả các thiết bị qPCR và không cần điều chỉnh nồng độ ROX trên các thiết bị khác nhau.Thuốc nhuộm màu xanh được thêm vào trong hỗn hợp trộn trước, có tác dụng đánh dấu khi thêm mẫu và chất pha loãng mẫu màu vàng được cung cấp cùng lúc.Khi mẫu được pha loãng bằng dung dịch pha loãng mẫu màu vàng và thêm vào hỗn hợp trộn trước phản ứng màu xanh lam, màu sắc sẽ chuyển từ xanh lam sang xanh lục, có thể đóng vai trò đánh dấu trong quá trình chuẩn bị hệ thống phản ứng và ngăn ngừa rò rỉ hoặc pha trộn sai.Phổ của thuốc nhuộm xanh lam và vàng không trùng lặp với thuốc nhuộm qPCR và không ảnh hưởng đến kết quả phản ứng.

Thông tin sản phẩm của 2 × Universal Blue GSK Green qPCR Master Mix:

Điều kiện bảo quản và xử lý với hỗn hợp tổng thể qPCR 2 × Universal Blue Green với 40 × Yellow Template Dilution Buffer:

Vận chuyển túi đá ướt;Bảo quản ở nhiệt độ -20 ℃, có giá trị trong 12 tháng.

Quy trình / Quy trình khảo nghiệm:

1. (Tùy chọn) pha loãng mẫu của 2 × Universal Blue GSK Green qPCR Master Mix:

Bộ dụng cụ này cung cấp Bộ đệm pha loãng tiêu bản MÀU VÀNG 40 lần, Dung dịch pha loãng tiêu bản màu vàng được pha loãng 40 lần có thể được sử dụng để xác định chính xác liệu Tiêu bản đã được thêm vào chất lỏng phản ứng qPCR hay chưa bằng cách thay đổi màu sắc của chất lỏng.Lấy hệ thống phản ứng qPCR 20ul làm ví dụ, theo lượng mẫu pha loãng được thêm vào dung dịch phản ứng qPCR 20ul, phương pháp pha loãng tương ứng của mẫu ban đầu có thể được tham khảo bảng sau (lấy mẫu ban đầu được pha loãng đến 100ul làm ví dụ ):

Thí dụ:

Mẫu đã pha loãng 2ul nên được thêm vào hệ thống phản ứng qPCR 20ul.

Lấy hệ thống Pha loãng Mẫu 100ul làm ví dụ, khi thể tích Mẫu ban đầu là 20ul, 25ul Bộ đệm pha loãng Mẫu màu vàng 40x được thêm vào, và sau đó Nước không chứa Nuclease 55ul được thêm vào tổng thể tích 100ul.

BỘ NÂNG CẤP TEMPLATE MÀU VÀNG 40x giờ là 10x.Thêm 2ul của Mẫu đã pha loãng vào Dung dịch đệm pha loãng 20ul, và Dung dịch đệm pha loãng mẫu 40 × MÀU VÀNG cuối cùng là 1x.Kết luận, Bộ đệm pha loãng mẫu màu vàng phải bằng 1 lần trong hệ thống qPCR cuối cùng.

Ghi chú:Nếu không cần pha loãng tiêu bản hoặc nếu không sử dụng dung dịch pha loãng tiêu bản của G3362-2, bạn có thể bỏ qua bước này.

2. Đề xuất hệ thống phản ứng qPCR về 2 × Universal Blue GSK Green qPCR Master Mix ::

một.Thông thường, có thể thu được hiệu ứng khuếch đại tốt với nồng độ cuối cùng là 0,2um.Khi hiệu suất phản ứng kém, nồng độ mồi có thể được điều chỉnh trong khoảng 0,2-1,0um.

b.Lượng bổ sung tiêu bản thay đổi theo số lượng bản sao của gen đích trong dung dịch tiêu bản, và lượng bổ sung tiêu bản thích hợp được thảo luận bằng cách pha loãng gradient.Lượng DNA khuôn mẫu bổ sung tốt nhất trong hệ thống phản ứng 20ul là ít hơn 100 ng.Khi cDNA (dung dịch phản ứng RT) của phản ứng RT-PCR được sử dụng làm khuôn mẫu, lượng bổ sung không được vượt quá 10% tổng thể tích của dung dịch phản ứng PCR.

3. Quy trình phản ứng PCR (có thể được điều chỉnh theo các thiết bị):

a: Nếu độ đặc hiệu của bộ khuếch đại cần được cải thiện, có thể sử dụng quy trình hai bước hoặc nhiệt độ ủ;Để nâng cao hiệu quả khuếch đại, có thể sử dụng quy trình ba bước hoặc kéo dài thời gian.

Ghi chú:

1. Vui lòng đeo găng tay dùng một lần trong khi vận hành để tránh nhiễm RNase.

2. Các sản phẩm phiên mã ngược có thể được lưu trữ ở -20 ℃ trong một thời gian ngắn.Nếu cần bảo quản lâu dài, nên bảo quản chúng ở nhiệt độ -80 ℃ sau khi đóng gói để tránh lặp lại chu kỳ đông lạnh-rã đông.

3. Nếu tiêu bản có nguồn gốc từ sinh vật nhân chuẩn, nên chọn mồi Oligo (dT) 18 và ghép nó với đuôi 3 'Poly A của mRNA sinh vật nhân chuẩn để thu được cDNA có chiều dài đầy đủ cao nhất.

4. Để phiên mã ngược RNA nhân sơ, nên sử dụng Primer Hexamer ngẫu nhiên hoặc Gene cụ thể.

5. Random Hexamer Primer có khả năng ứng dụng rộng rãi và phù hợp với các khuôn mẫu mRNA, rRNA, tRNA, RNA nhỏ và lncRNA.

6. Nếu tiến hành phiên mã ngược bằng xét nghiệm qPCR, có thể trộn Oligo (dT) 18 Primer và Random Hexamer Primer để làm cho hiệu quả tổng hợp cDNA ở tất cả các vùng của mRNA là như nhau, giúp cải thiện tính xác thực và độ lặp lại của kết quả định lượng.

7. Nếu các mồi qPCR tiếp theo được thiết kế trên các exon, thì bước loại bỏ bộ gen có thể được bỏ qua.

Nguyên tắc thiết kế sơn lót:

1. Chiều dài của sản phẩm khuếch đại được khuyến khích trong khoảng 80-300 bp;

2. Chiều dài lớp sơn lót: 18-25 bp;

3. Hàm lượng cơ bản G + C trong sơn lót nên từ 40% -60%;

4. Chênh lệch giá trị Tm giữa mồi thuận và mồi ngược nhỏ hơn 2 ℃, và giá trị Tm trong khoảng 58-62 ℃ là tốt nhất;

5. Tính ngẫu nhiên của phân phối cơ sở;

6. Tốt hơn hết là các đoạn mồi không chứa các chuỗi tự bổ sung, nếu không chúng sẽ tạo thành cấu trúc kẹp tóc thứ cấp;

7. Không được có nhiều hơn 4 bazơ bổ sung hoặc tương đồng giữa hai mồi, nếu không sẽ hình thành chất dimer của mồi, đặc biệt là sự xen phủ bổ sung ở đầu 3 ';

8. Cơ sở đầu cuối 3 'của sơn lót được đề xuất là G hoặc C;

9. Không tìm thấy sản phẩm không đặc hiệu nào khác trong kết quả so sánh của NCBI.

Các vấn đề thường gặp và giải pháp:

Nếu bạn cần thêm thông tin về hỗn hợp tổng thể qPCR 2 × Universal Blue GSK Green với 40 × Yellow Template Dilution Buffer, vui lòng cho chúng tôi biết trực tuyến, cảm ơn bạn.